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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測試盒(微量法)

發(fā)布時間:2021-04-08   點擊次數(shù):950次

測定意義:線粒體復(fù)合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱CoQ-細(xì)胞色素C還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負(fù)責(zé)把還原型CoQ的氫傳遞給細(xì)胞色素C,生成還原型細(xì)胞色素C。

測定原理:與氧化型細(xì)胞色素C不同,還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅲ酶活性。

需要的儀器,耗材:可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本處理
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 4 ℃ 600 g離心10min。將上清液移至另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心15min。
3、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ(此步可選做,可以判斷線粒體提取效果)。
4、 在沉淀中加入200μL提取液,超聲波破碎(功率20%,超聲5秒,間隔10秒,重復(fù)15次),用于復(fù)合體Ⅲ酶活 性測定,并且用于蛋白含量測定。 

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