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以下有關(guān)昆蟲elisa檢測試劑盒的操作程序你一定要認(rèn)真看完

發(fā)布時間:2020-09-27   點擊次數(shù):1681次
  昆蟲elisa檢測試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
 

  昆蟲elisa檢測試劑盒的操作程序:
  1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑系統(tǒng)提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋)按下表格執(zhí)行:
  120ng/ml:(5號標(biāo)準(zhǔn)品):120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  60ng/ml:(4號標(biāo)準(zhǔn)品):120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  30ng/ml:(3號標(biāo)準(zhǔn)品):120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  15ng/ml:(2號標(biāo)準(zhǔn)品):120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  7.5ng/ml:(1號標(biāo)準(zhǔn)品):120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  3、 加樣:
  a、空白孔:(空白對照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗保幼激素(JH)抗體,鏈霉親和素-HRP,其余各步操作相同 ;
  b、標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,鏈霉親和素-HRP50μl(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素標(biāo)記抗體,故在操作時不加,只加鏈霉素-HRP);
  c、樣本反應(yīng)孔:加入樣本40μl,然后各加入抗保幼激素(JH)抗體10μl、鏈霉親和素-HRP(空白孔除外)50μl。蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
  4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  6、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
  7、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  8、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
  結(jié)果判斷:
  1、每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。
  2、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應(yīng)用軟件來計算。
  3、手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),OD值作縱坐標(biāo),以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析計算結(jié)果。
  4、若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
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