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牛ELISA檢測試劑盒不同類型的樣本的處理方法

發(fā)布時間:2020-05-26   點擊次數(shù):1960次
   通常我們可用于牛ELISA檢測試劑盒檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證牛ELISA檢測的正確性和準確性,下面簡單介紹一下。
 
  1、細胞培養(yǎng)上清:
取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
  2、細胞裂解液:
  a、吸去培養(yǎng)板內的培養(yǎng)基,用胰酶消化細胞,加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
  b、收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預冷的PBS潤洗3次。
  c、加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
  d、將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
  3、血清:
  血清是zui常用于ELISA試劑盒檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
  用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
  采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的牛ELISA檢測試劑盒檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
  4、血漿:
  用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
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